通過(guò)基因工程技術(shù)將T細(xì)胞激活，并裝上定位導(dǎo)航到腫瘤的裝置-腫瘤嵌合抗原受體（Chimeric Antigen Receptor, CAR），可以將T細(xì)胞這個(gè)普通“武器”改造成“超級(jí)武器”，即為CAR-T細(xì)胞。CAR-T是治療B細(xì)胞惡性腫瘤的有效療法，但在實(shí)體瘤中療效有限。這些限制性的因素包括：腫瘤部位T細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)不足、抑制信號(hào)的持續(xù)存在、腫瘤限制性抗原的缺乏。此外，CAR-T療法的治療潛力也取決于CAR-T與腫瘤細(xì)胞之間形成裂解免疫突觸（lytic immune synapse, IS）的形成。
糖基化是常見(jiàn)的蛋白質(zhì)修飾之一，產(chǎn)物以糖蛋白的形式出現(xiàn)。糖蛋白是聚糖與蛋白質(zhì)的天冬酰胺或絲氨酸、蘇氨酸殘基共價(jià)連接而成。與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞往往表現(xiàn)出異常的糖基化，形成一種極其多樣的細(xì)胞外聚糖外衣。這種聚糖外衣可能通過(guò)屏蔽免疫細(xì)胞的抗原表位或干擾免疫細(xì)胞功能，對(duì)抗腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生不利影響。b1–6 N-聚糖分支增多是腫瘤細(xì)胞頻繁的變異之一，該糖基化修飾是N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V（由MGAT5基因編碼）活性增加的結(jié)果。MGAT5的表達(dá)受Ras-Raf-Ets信號(hào)通路的正向調(diào)控，該通路在腫瘤中通常異常激活，并直接參與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，在多種腫瘤模型中均被證明與生存降低和預(yù)后不良相關(guān)。
2022年1月19日，來(lái)自意大利的研究人員發(fā)現(xiàn)多種腫瘤的細(xì)胞外N-聚糖表達(dá)豐度與CAR-T細(xì)胞殺傷程度呈負(fù)相關(guān)。他們通過(guò)敲除胰腺癌（PAC）中的MGAT5發(fā)現(xiàn)，N-聚糖能干擾免疫突觸形成，減少轉(zhuǎn)錄激活、細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性，保護(hù)腫瘤免受CAR-T細(xì)胞的殺傷。這意味著，一旦破壞腫瘤細(xì)胞上的N-聚糖這層“糖衣”，CAR-T細(xì)胞活性即得到增強(qiáng)，成為殺傷胰腺癌的重磅“炮彈”。研究成果在線(xiàn)發(fā)表于新一期的Science Translational Medicine（STM）。
研究成果（圖源：STM）
為了揭示N-聚糖在胰腺癌中的生物學(xué)作用，研究人員首先利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析了參與這些糖基合成的糖基轉(zhuǎn)移酶的突變情況，發(fā)現(xiàn)cBioportal的3738名患者中，有19%樣本攜帶參與N-聚糖合成的糖基轉(zhuǎn)移酶的基因組改變，且這一特征與不良預(yù)后相關(guān)。進(jìn)一步分析確定僅分支型N-聚糖合成的基因變異與惡化的無(wú)病生存顯著相關(guān)，且大多數(shù)變異都是基因擴(kuò)增。結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中胰腺癌樣本的RNA測(cè)序數(shù)據(jù)的富集分析顯示，與健康對(duì)照組相比，患者中分支型N-聚糖合成通路顯著富集。在富集的基因中，研究者重點(diǎn)關(guān)注了分支型N-聚糖生物合成的關(guān)鍵基因MGAT5。
胰腺癌患者的N-聚糖合成相關(guān)的基因變異及預(yù)后（圖源：STM）
敲除MGAT5后發(fā)現(xiàn)，CAR-T細(xì)胞44v6.28?的抗腫瘤效果顯著增強(qiáng)，表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞溶解活性增加，干擾素和腫瘤壞死因子水平上升。這些結(jié)果說(shuō)明，分支型N-聚糖屏蔽了CAR-T對(duì)胰腺癌抗原44v6.28?的靶向性。
敲除MGAT5后腫瘤細(xì)胞與CAR-T細(xì)胞的變化（圖源：STM）
為了探明N-聚糖缺陷腫瘤細(xì)胞使得抗腫瘤療效增強(qiáng)的基礎(chǔ)，研究者分析了CAR-T細(xì)胞靶向過(guò)程的限制性步驟——免疫突觸IS的形成。結(jié)果顯示，缺乏MGAT5聚糖產(chǎn)物的胰腺癌細(xì)胞與CAR-T44v6.28?之間形成了良好的IS，具有更高的F -肌動(dòng)蛋白積累，更強(qiáng)的顆粒聚合，以及MTOC到F-肌動(dòng)蛋白的距離縮短，這些是功能性細(xì)胞溶解的三個(gè)公認(rèn)參數(shù)。對(duì)照組細(xì)胞中則沒(méi)有觀(guān)察到這種差異。該團(tuán)隊(duì)還結(jié)合Jurkat細(xì)胞模型來(lái)分析細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件，也得到與上述一致的結(jié)論。這些發(fā)現(xiàn)支持了胰腺癌對(duì)CAR-T細(xì)胞治療的抵抗機(jī)制，即腫瘤接觸和CAR-T信號(hào)強(qiáng)度受分支型N-聚糖的調(diào)控。
敲除MGAT5后免疫突觸與功能性細(xì)胞溶解情況（圖源：STM）
既然基因?qū)用鎸?duì)N-聚糖的抑制顯示出了良好效果，那么從藥理學(xué)上克服腫瘤糖基化是否也能取得類(lèi)似效果？研究者巧妙地利用葡萄糖/甘露糖類(lèi)似物2DG來(lái)實(shí)現(xiàn)這一干預(yù)。2DG此前已被報(bào)道能干擾N -鏈糖基化，合并成新生糖蛋白的脂聯(lián)寡糖，引起糖基化整體異常狀態(tài)。研究人員發(fā)現(xiàn)，經(jīng)2DG處理的胰腺癌細(xì)胞能被44v6.28細(xì)胞更有效地殺死，并在44v6.28細(xì)胞中引發(fā)了更強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄作用，但在對(duì)照細(xì)胞中卻沒(méi)有這種效應(yīng)。在胰腺癌小鼠異種移植模型中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，無(wú)論是低腫瘤負(fù)荷、高CAR-T細(xì)胞劑量模型，還是高腫瘤負(fù)荷、低CAR-T細(xì)胞劑量模型，2DG預(yù)先注射都能使得腫瘤對(duì)CAR-T細(xì)胞的攻擊更加敏感。此外，該研究還觀(guān)察到細(xì)胞表達(dá)抑制性受體的頻率顯著降低，如T細(xì)胞免疫球蛋白域和粘蛋白域3 （TIM-3）、淋巴細(xì)胞活化3、程序性細(xì)胞死亡蛋白1 （PD-1）和CD57。其中，PD-L1的PD-1相互作用在N-聚糖去除后減弱較為顯著。這些發(fā)現(xiàn)表明，與2DG聯(lián)合使用不僅可以提高腫瘤清除能力，還可能使CAR-T細(xì)胞避免發(fā)生免疫檢查點(diǎn)的抑制。
2DG處理后胰腺癌對(duì)44v6.28細(xì)胞敏感度的影響（圖源：STM）
在高腫瘤負(fù)荷胰腺癌異種移植小鼠模型中，研究人員比較2DG和44v6.28細(xì)胞單獨(dú)以及組合的長(zhǎng)期聯(lián)合治療。在T3M-4異種移植模型中，重復(fù)注射2DG單獨(dú)治療小鼠被證明是無(wú)益的，而2DG和44v6.28細(xì)胞組合提供了持久的腫瘤控制，優(yōu)于兩種單獨(dú)治療方案。這一結(jié)果在BxPC3異種移植模型中亦得到證實(shí)。以上結(jié)果均表明，與2DG聯(lián)合治療可以提高44v6.28?細(xì)胞的效力并減輕T細(xì)胞衰竭。不僅在胰腺癌，研究人員還發(fā)現(xiàn)與2DG共同治療可提高CAR-T細(xì)胞對(duì)包括膀胱癌和卵巢癌在內(nèi)的多種腫瘤的治療效果。
胰腺癌模型中2DG處理、44v6.28細(xì)胞治療的比較（圖源：STM）
總之，CAR-T細(xì)胞與2DG聯(lián)合治療胰腺癌展現(xiàn)出良好的潛力，并且在其他多種腫瘤的治療中也取得良好效果，包括來(lái)自肺、卵巢和膀胱的腫瘤?？偟膩?lái)說(shuō)，這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外N-聚糖通過(guò)增加CAR-T細(xì)胞激活閾值和促進(jìn)CAR-T細(xì)胞衰竭使得腫瘤發(fā)生治療抵抗，也為合理改進(jìn)實(shí)體腫瘤治療方法提供了新的思路和方向。
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