近年來，以CAR-T為代表的癌癥免疫治療技術(shù)飛速發(fā)展，已在多種癌癥類型中取得重大突破。然而，CAR-T療法在實(shí)體腫瘤治療方面收效甚微，并且時常會引發(fā)細(xì)胞因子風(fēng)暴等嚴(yán)重的副作用反應(yīng)。
日本東京大學(xué)和名古屋大學(xué)的研究人員在 Molecular Therapy: Oncolytics 期刊上發(fā)表了題為：Efficacy of cancer-specific anti-podoplanin CAR-T cells and oncolytic herpes virus G47Δ combination therapy against glioblastoma 的研究論文。
該研究首次證明了CAR-T細(xì)胞和溶瘤病毒的聯(lián)合療法可以阻止膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）的生長并顯著提升小鼠存活率，為免疫聯(lián)合療法治療實(shí)體腫瘤提供了新的見解。
膠質(zhì)母細(xì)胞瘤與新型 CAR-T 細(xì)胞
膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）是一種嚴(yán)重的惡性腦腫瘤，患者中位生存期不到兩年。此前，該研究團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了靶向PDPN位點(diǎn)的第三代CAR-T細(xì)胞（NZ-1-CAR-T細(xì)胞）并發(fā)現(xiàn)其在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中都對PDPN陽性的GMB細(xì)胞有特異性抑制作用。然而，PDPN也存在于間皮、淋巴內(nèi)皮和腦膜等正常組織中，這使得PDPN靶向療法存在著一些安全風(fēng)險(xiǎn)。
為了更精準(zhǔn)地靶向GBM細(xì)胞，研究人員隨后設(shè)計(jì)了一種針對人PDPN的癌癥特異性單克隆抗體（Lp2）。Lp2不會識別表達(dá)PDPN的正常細(xì)胞，從而有望增強(qiáng)CAR-T療法對癌細(xì)胞的特異性識別能力。
研究人員以Lp2為基礎(chǔ)構(gòu)建了新型CAR-T細(xì)胞，Lp2-CAR-T細(xì)胞。體外實(shí)驗(yàn)表明這種新CAR-T細(xì)胞可以有效溶解LN229/hPDPN細(xì)胞（表達(dá)PDPN的GBM細(xì)胞），而對PDPN陰性的LN229細(xì)胞和Met-5A細(xì)胞不產(chǎn)生顯著影響。此外，將Lp2-CAR-T細(xì)胞與LN229/hPDPN細(xì)胞共培養(yǎng)，可以在上清液中檢測到100.1pg/ml的干擾素-γ（IFN-γ），這比模擬CAR-T細(xì)胞（Mock-CAR-T cell）高出十倍以上。他們還觀察到Lp2-CAR-T細(xì)胞對患者來源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞TGS01也具有溶解作用。
以上結(jié)果表明Lp2-CAR-T細(xì)胞在體外對GBM細(xì)胞表現(xiàn)出特異性的細(xì)胞溶解作用，并且在體內(nèi)系統(tǒng)注射這些CAR-T細(xì)胞后可以顯著抑制腫瘤的生長。
CAR-T 與溶瘤病毒的免疫聯(lián)合療法
同時利用CAR-T與溶瘤病毒的免疫聯(lián)合療法有望提升CAR-T對實(shí)體瘤的治療效果。溶瘤病毒不僅能直接殺死實(shí)體腫瘤，還能引起抗腫瘤免疫反應(yīng)，破壞腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制成分，促進(jìn)CAR-T細(xì)胞對實(shí)體瘤的浸潤。此外，溶瘤病毒還可以裂解癌細(xì)胞，從而釋放出癌細(xì)胞的特征信息，進(jìn)一步激活CAR-T細(xì)胞。
在這項(xiàng)研究中，研究人員將溶瘤病毒G47Δ加入到Lp2-CAR-T細(xì)胞與LN229/hPDPN細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，發(fā)現(xiàn)IFN-γ的產(chǎn)生量從100.1pg/mL上升到152.9pg/mL。實(shí)時細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明Lp2-CAR-T細(xì)胞或G47Δ單獨(dú)使用也能顯著抑制癌細(xì)胞增殖，但是兩者聯(lián)合使用會進(jìn)一步降低LN229/hPDPN和TGS01細(xì)胞的活力。此外，與單藥治療相比，使用Lp2-CAR-T和G47Δ的聯(lián)合療法時，可以更早觀察到抗腫瘤作用。這些體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Lp2-CAR-T和G47Δ的聯(lián)合使用比Lp2-CAR-T的單獨(dú)使用更加有效。
小鼠實(shí)驗(yàn)：較佳的腫瘤抑制效果
研究人員通過注射PDPN轉(zhuǎn)染的LN229/hPDPN膠質(zhì)瘤細(xì)胞在小鼠中建立了皮下腫瘤模型。當(dāng)腫瘤平均直徑達(dá)到5mm時，他們開始往小鼠體內(nèi)注射CAR-T細(xì)胞和溶瘤病毒G47Δ，并持續(xù)監(jiān)測小鼠腫瘤大小和存活情況。
腫瘤體積的監(jiān)測結(jié)果表明，CAR-T和溶瘤病毒單獨(dú)使用或聯(lián)合使用時都能顯著阻止小鼠腫瘤生長，但是聯(lián)合療法具有較佳的腫瘤抑制效果，接受聯(lián)合療法治療的小鼠，其腫瘤大小不到單獨(dú)療法治療組的1/2。
此外，相比于對照組，聯(lián)合療法治療的小鼠，其40天存活率提高了5倍以上。各組小鼠中位總存活期分別為：Mock-CAR-T（33天），G47Δ（35天），Lp2-CAR-T（42天），G47 Δ和Lp2-CAR-T聯(lián)合療法（51天）。聯(lián)合療法顯著延長了小鼠的存活時間，且半數(shù)小鼠存活期長達(dá)60天以上。另外值得一提的是，在本次動物實(shí)驗(yàn)中，沒有在小鼠身上觀察到不良反應(yīng)。
這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CAR-T細(xì)胞和溶瘤病毒的聯(lián)合療法可以阻止人源膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）的生長并顯著提升小鼠存活率，有望為CAR-T的實(shí)體瘤治療困境提供新的突破口。
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