接下來，研究人員評估α-1,2- MAN是否有助于ICCA啟動細胞的特性。腫瘤干細胞(Cancer stem cells, CSCs)主要存在于低糖或營養(yǎng)儲存的微環(huán)境中。在1-2代低糖條件下，異位表達FLAG標記的MAN1C1顯著減少α-1,2- man +CD133+細胞的球形成。極限稀釋分析被廣泛應用于干細胞頻率的測定。
通過體外有限稀釋實驗，研究人員發(fā)現(xiàn)MAN1C1過表達抑制了CD133+α-1,2- man +細胞的干細胞活性。MAN1C1的異位表達抑制了CD133+α-1,2- man +細胞的腫瘤啟動能力，提高了腫瘤小鼠的存活率?？傊ㄟ^MAN1C1過表達抑制α-1,2- man修飾抑制了ICCA啟動細胞的自我更新和腫瘤發(fā)生。
通過MAN1C1過表達抑制α-1,2- man可抑制ICCA啟動細胞的腫瘤發(fā)生
FIP200是哺乳動物細胞自噬體形成所必需的。在營養(yǎng)剝奪或缺氧的情況下，自噬維持tic的自我更新。α-1,2-MAN對ICCA啟動細胞自噬的作用。LC3-I向LC3-II的轉化被用作自噬激活的指標。MAN1C1過表達顯著降低CD133+α-1,2- man +細胞中LC3-II與LC3-I的比值。當自噬被激活時，綠色熒光蛋白連接LC3 (GFP-LC3)集中在自噬液泡中形成點狀綠色熒光。MAN1C1的異位表達減少了GFP-LC3小點的形成?？偟膩碚f，MAN1C1減少了ICCA啟動細胞的自噬。
接下來，研究人員評估了FIP200在man1c1降低的自噬中的作用。FIP200的異位表達阻斷了MAN1C1對CD133+α-1,2- man +細胞自噬的負性作用，MAN1C1過表達對CD133+α-1,2- man +細胞自我更新的抑制作用被FIP200過表達部分挽救。過表達FIP200可逆轉MAN1C1對CD133+α 1,2- man +細胞的抑制作用。綜上所述，α 1,2- man通過上調FIP200的表達來增強肝內膽管癌起始細胞的自我更新和成瘤能力。
