基因編輯領(lǐng)域又迎來了一個重磅消息：昨日，四川大學(xué)華西醫(yī)院盧鈾教授團(tuán)隊(duì)發(fā)布了世界一個CRISPR基因編輯臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)——證實(shí)使用CRISPR-Cas9編輯的T細(xì)胞在臨床上治療晚期肺癌等疾病，是安全可行的。
他們在期刊《自然·醫(yī)學(xué)》報(bào)道了由CRISPR–Cas9 PD-1編輯的T細(xì)胞在晚期非小細(xì)胞肺癌患者中進(jìn)行的首次人類I期臨床試驗(yàn)的結(jié)果（ClinicalTrials.gov NCT02793856）。論文題為“Safety and feasibility of CRISPR-edited T cells in patients with refractory non-small-cell lung cancer”。
研究人員們得出結(jié)論，CRISPR–Cas9基因編輯的T細(xì)胞的臨床應(yīng)用通常是安全可行的。未來的試驗(yàn)應(yīng)使用優(yōu)異的基因編輯方法來提高治療效果。
聚集有規(guī)律地間隔的CRISPR–Cas9編輯免疫檢查點(diǎn)基因，可以提高T細(xì)胞療法的療效，但首要的任務(wù)是了解這種操作的安全性和可行性，其次才是其功效，探索性目標(biāo)則包括跟蹤編輯的T細(xì)胞。
這個試驗(yàn)可以追溯到2016年6月——當(dāng)時，盧鈾教授團(tuán)隊(duì)發(fā)起了世界一個CRISPR療法人體試驗(yàn)，卻對CRISPR-Cas9在臨床應(yīng)用中的安全性仍存在諸多疑慮。
而如今，CRISPR–Cas9基因編輯技術(shù)和癌癥免疫療法都獲得了巨大的飛躍。用于阻斷PD-1/PD-L1通路的PD-1抑制劑，吸引了盧鈾教授團(tuán)隊(duì)目光。能否破壞T細(xì)胞的PD-1，然后將T細(xì)胞回輸給患者，從而實(shí)現(xiàn)晚期肺癌的治療？
于是，該團(tuán)隊(duì)開始在久治無效的晚期肺癌患者身上展開了臨床研究，他們在經(jīng)過多種療法后不見成效，并加入了這項(xiàng)研究成為志愿者。，共有22例患者納入研究。
在試驗(yàn)過程中，研究團(tuán)隊(duì)使用Cas9和單向?qū)NA質(zhì)粒的電穿孔，通過共轉(zhuǎn)染離體生產(chǎn)PD-1編輯的T細(xì)胞，從而破壞PD-1基因的2號外顯子。
圖1：示意圖顯示了患者流程和研究設(shè)計(jì)，包括患者入組、計(jì)劃的劑量組、干預(yù)、隨訪和結(jié)果評估。
試驗(yàn)中，有5名患者因T細(xì)胞體外擴(kuò)增不足，沒有接受治療，余下的17名患者均獲得了高活性（90%）的編輯后的T細(xì)胞。在回輸編輯過的T細(xì)胞之前，有2人疾病進(jìn)展，1人肺部感染，1人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎加重，1人主動退出研究。有12人接受了T細(xì)胞的回輸治療。
這12人在28天的周期內(nèi)，分三次注射PD-1被編輯過的T細(xì)胞，每位患者每次回輸T細(xì)胞的中位數(shù)是1.33億個。
從整體效果來看，基因編輯的效率在8.7%-31.2%之間，中值是20.1%。在編輯過的T細(xì)胞中，PD-1的表達(dá)水平明顯降低，PD-1的破壞率在33.7%-67%之間，中值是46.3%。
圖2：T細(xì)胞中CRISPR–Cas9介導(dǎo)的PD-1基因編輯
所有與治療相關(guān)的不良事件均為1/2級，這些不良事件包括淋巴細(xì)胞減少癥（3例）、疲勞（3例）、白細(xì)胞減少癥（2例）、發(fā)燒（2例）、關(guān)節(jié)痛（2例）和皮疹（2例）。輸注后在外周血中可檢測到編輯過的T細(xì)胞。中位無進(jìn)展生存期為7.7周（95％置信區(qū)間為6.9-8.5周），中位總生存期為42.6周（95％置信區(qū)間為10.3-74.9周）。通過下一代測序，在18個候選位點(diǎn)，脫靶事件的中位突變頻率為0.05％（范圍為0-0.25％）。
擴(kuò)展數(shù)據(jù)圖2：與治療相關(guān)的不良事件及其持續(xù)時間。
他們的T細(xì)胞中位編輯效率是5.81%。與未被編輯的T細(xì)胞相比，在被編輯過的T細(xì)胞中，CD8和IFN-γ雙陽性的占比顯著增加。這表明，破壞T細(xì)胞的PD-1之后，T細(xì)胞的活性增強(qiáng)了。而另一方面，中位脫靶率的結(jié)果為0.05%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于1.69%的中靶率——研究人員因此得出關(guān)于CRISPR-Cas9編輯T細(xì)胞這一操作安全性方面的結(jié)論。
圖3：NGS和WGS進(jìn)行的脫靶情況分析
截至2020年1月31日，所有患者出現(xiàn)疾病進(jìn)展。在12名患者中，有11名（91.7％）死于腫瘤進(jìn)展，所有患者的死亡均與治療無關(guān)。剩下的1名患者仍在接受其他治療。
可以共享的任何數(shù)據(jù)和材料將通過材料轉(zhuǎn)讓協(xié)議發(fā)布。支持該研究結(jié)果的所有其他數(shù)據(jù)將在可能的情況下由合理的要求由相應(yīng)的作者提供。
該研究報(bào)告的原始測序數(shù)據(jù)已保存在中國科學(xué)院北京基因組研究所BIG數(shù)據(jù)中心的人類基因組序列檔案庫（http://bigd.big.ac.cn/gsa-human/）中。
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